ELISA实验最终需要酶催化底物显色反应来完成，在最佳时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反应系统中，S5出现淡蓝色，S1 – S3有明显的阶梯型蓝色，便需要终止反应；或者根据最高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定，OD620=0.9-0.95之间时即可终止。