小编含泪发问：你有没有遇到过——

抽黏液样本像在吸珍珠奶茶里的最后那颗黑糖珍珠？

匀浆组织时,枪头仿佛陷入了"黏糊糊的爱情"无法自拔？

好不容易吸上来一点,一检测——数据飘得连亲妈都不认识？

别慌！今天这篇「粘稠样本处理求生指南」,专治各种不服！

 

一 为什么你的样本"黏到自闭"？

粘稠样本主要有两大"门派"：
1. 黏液派：痰液 支气管肺泡灌洗液 胃黏液...
（主要是黏蛋白Mucin和高分子糖蛋白在"作妖"）

2. 组织派：肿瘤组织 肝脏 脑组织...
（DNA/RNA断裂释放 细胞碎片过多是元凶）

它们共同特点：
堵塞枪头,取样不准
干扰试剂接触,反应不全
增加背景噪音,数据不准

 

二 "物理破壁法"：大力出奇迹？

1. 超声大法好（但别过头！）

适用：组织匀浆 细胞沉淀

注意：冰浴进行！脉冲模式（超声3s,间歇5s）,总时长勿超2min,防止蛋白降解！

 

2. 过滤是条捷径（但会折损！）

选用低吸附性滤膜（如PVDF）

常见孔径：0.45μm（去大碎片） 0.22μm（除菌）

温馨提示：过滤会损失部分目标蛋白,需做回收率验证！

 

3. 离心升级：梯度离心来帮忙

高速离心（12000-15000g,10-15min）可去除大部分碎片

对特别黏的样本,可采用密度梯度离心（如Percoll试剂）

 

三 "化学破粘法"：四两拨千斤

1. 酶学处理——精准拆弹

痰液/BALF推荐：
先用等体积的二硫苏糖醇（DTT） 处理（终浓度0.1%-0.5%）
37℃孵育15-30min,高效裂解黏蛋白二硫键

替代方案：可用乙酰半胱氨酸（NAC）,但效果稍弱

 

2. 稀释大法——简单但有效

用PBS或生理盐水适当稀释（2-5倍）

注意：稀释会同步降低目标物浓度,需确保仍在检测线性范围内

 

3. 添加剂助力——润物细无声

在样本中加入少量核酸酶（Benzonase）（50-100 U/mL）
37℃处理10min,有效降解核酸,降低粘度（对蛋白/细胞因子检测无影响）

也可尝试添加CHAPS等去垢剂（0.5%-1%）,帮助分散大分子

 

 

四 终极组合拳：实战流程演示

以最难搞的痰液样本为例：

 

1. 预处理：取200μL痰液 + 等体积0.1% DTT溶液,涡旋混匀

2. 孵育：37℃水浴30min,期间涡旋2-3次

3. 离心：4000g离心10min,取上清

4. 除核酸：加入终浓度50U/mL的Benzonase,37℃孵育10min

5. 再离心：12000g离心15min,收获清澈上清

6. 分装保存：-80℃速冻,避免反复冻融

经过这一套"大保健",再粘的样本也能变得温顺如水！

 

五 避坑指南：这些雷区不要踩！

 避免反复冻融：易形成聚合物,越冻越粘！

 勿过度超声：蛋白变性给你看！

 忌盲目添加高浓度去垢剂：干扰后续ELISA/免疫检测！

 做好预实验：不同样本优化处理条件！

 始终设置处理前后对照：评估回收率和干扰程度！

 

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 强悍抗干扰能力：采用经过特殊筛选的高特异性抗体对,对样本中残留的DNase DTT 去垢剂等常见前处理试剂具有极高的耐受性,有效降低非特异性结合,确保结果准确可靠.
 高精度与回收率：即便样本经过稀释或多次处理,其优异的灵敏度和线性范围仍能保证目标因子的高回收率,让您无需担心前处理带来的浓度损失.
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