产品仅供科研使用，不得用于临床诊断 !
| 产品名称 | 科研 小鼠百日咳IgG抗体（PT IgG）检测试剂盒 |
| 产品应用 | elisa |
| 反应种属 | 小鼠 |
| 检测范围 | 2.5 ng/mL– 80 ng/mL |
| 物理性能 | 各液体组分澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。 |
| 用途 | 用于检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中小鼠百日咳lgG抗体（PTIgG）的浓度。 |
| 实验原理 | 本试剂盒采用间接两步法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被百日咳蛋白（固相抗原）的微 孔酶标板中，加入不同浓度校准品和待测样本，经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，再 加入抗小鼠IgG-HRP（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相 表面形成固相抗原-抗体-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝 色产物，在终止液作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD 值）与待测样品中待测抗体的浓度呈正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本待测抗体的浓 度。 |
| 特异性 | 本试剂盒识别天然和重组小鼠百日咳lgG抗体（PTIgG），与结构类似物无交叉。 |
| 重复性 | 板内，板间变异系数均<10%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之间。 |
| 试验所需自备试验器材 | 1.酶标仪(450nm) 2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 4.蒸馏水或去离子水 |
| 操作程序 | 1、所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。 2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。 3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。 4、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔加待测样 本50μL，空白孔不加，用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 5、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸 上拍干。如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板， 添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上， 充分拍干反应板。 6、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。 7、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 8、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸 上拍干。如此重复4次（共洗板5次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板， 添加浸泡20s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上， 充分拍干反应板。 9、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应 板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。10、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪450nm波长下读取各孔吸光度（OD值）。 |
| 注意事项 | 试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围，如果您的样品中检测物浓度 高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验拉梯度，以确定稀释倍数)。 |
| 问题分析 | ①问题描述：阴阳性对照结果不稳定 可能原因及相应对策： 1.吸液或加液不准——检查移液器及吸头 2.平衡时间太短——保证充足的平衡时间 3.洗涤不完全——保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量 ②问题描述：显色很弱或无色 可能原因及相应对策： 1.孵育时间太短——保证充足的孵育时间 2.实验温度不正确——使用推荐的实验温度 3.试剂体积不够或漏加/稀释不正确——检查吸液及加液过程，保证所有试剂按顺序足量添加 4.酶标记物失活或底物失效——混合酶结合物和底物，通过迅速显色来检查判断 ③问题描述：读数数值低 可能原因及相应对策： 1.酶标仪设置不正确——在酶标仪上检查波长及滤光片设置/提前打开酶标仪预热 ④问题描述：变异系数大 可能原因及相应对策： 1.加液不正确——检查加液情况 ⑤问题描述：背景值高 可能原因及相应对策： 1.检测抗体的工作浓度过高——使用推荐的稀释倍数 2.酶标板洗涤不完全——保证每步清洗完全；如果用自动洗板机，请检查所有的出口是否有堵塞；是否使用试剂盒配备的洗涤液 3.洗液有污染——配制新的洗液 ⑥问题描述：灵敏度低 可能原因及相应对策： 1.ELISA试剂盒保存不当——按说明书要求保存相关试剂 2.读数前未终止——OD读数前应在每孔中加入终止液 |
| 声明 | 试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。 |
